常見問答

體外診斷試劑的主要類型和技術原理?

體外診斷試劑被廣泛應用於醫學科研與臨床檢驗中,因質量穩定、效果可靠,其不但為科研和診療提供了依據,也為疾病的預防、控製提供了技術資料。


體外診斷試劑品類繁多,涉及眾多學科門類,因學科間交叉現象日漸增多、新技術層出不窮,很難以某個原則為標準對其簡單分類。從臨床專業角度可將其分為臨床血液學體液檢驗類試劑、臨床化學類試劑、臨床免疫學試劑,及微生物學、細胞組織學、分子生物學試劑等;從方法學角度可將其分為化學顯色法、免疫比濁法、酶聯免疫法、膠體金法、免疫熒光法、化學發光試劑、分子生物學試劑、免疫組化試劑、免疫細胞化學試劑等。


臨(lin)床(chuang)生(sheng)化(hua)試(shi)劑(ji)主(zhu)要(yao)用(yong)於(yu)配(pei)合(he)半(ban)自(zi)動(dong)和(he)全(quan)自(zi)動(dong)生(sheng)化(hua)分(fen)析(xi)儀(yi)等(deng)儀(yi)器(qi)進(jin)行(xing)檢(jian)測(ce)。常(chang)用(yong)的(de)臨(lin)床(chuang)生(sheng)化(hua)試(shi)劑(ji)所(suo)采(cai)用(yong)的(de)分(fen)析(xi)方(fang)法(fa)和(he)技(ji)術(shu)原(yuan)理(li)有(you)多(duo)種(zhong),具(ju)體(ti)介(jie)紹(shao)如(ru)下(xia)。




光譜分析技術 


該技術是基於物質與輻射能作用時,測量由物質內部發生量子化的能級間躍遷而產生的發射、吸收或散射輻射所具有的波長和強度,從而進行分析的方法。按作用對象的不同,光譜分析技術可分為原子光譜法(測量離子、微量元素等)和分光光度法;按獲得方式的不同,該技術可分為吸光光度法和發射光譜法。


xiguangguangdufashigenjurongyezhongwuzhiduiguangxuanzexingxishoudetexingjinxingfenxidefangfa。youserongyeduiguangxianyouxuanzexingxishoudetexing,butongwuzhiyouyuqifenzijiegoubutong,duibutongbochangguangdexishounenglibutong,meizhongwuzhidouyoutedingdexishouguangpu。dangyidingbochangdeguangtongguogaiwuzhiderongyeshi,genjuwuzhiduiguangdexishouchengdu(吸光度)求出該物質含量的方法稱為吸光光度法。


吸xi光guang光guang度du法fa可ke分fen為wei比bi色se法fa和he分fen光guang光guang度du法fa兩liang大da類lei。比bi色se法fa又you可ke分fen為wei目mu視shi比bi色se法fa和he光guang電dian比bi色se法fa。分fen光guang光guang度du法fa與yu光guang電dian比bi色se法fa的de原yuan理li類lei似si,都dou是shi通tong過guo光guang電dian池chi或huo光guang電dian管guan測ce量liang溶rong液ye透tou光guang度du的de強qiang度du,來lai進jin行xing分fen析xi的de方fang法fa。


當dang利li用yong比bi色se法fa測ce定ding溶rong液ye中zhong的de某mou種zhong化hua學xue成cheng分fen時shi,通tong常chang需xu加jia入ru顯xian色se劑ji,使shi其qi產chan生sheng有you色se化hua合he物wu,顏yan色se的de深shen淺qian與yu待dai測ce化hua學xue成cheng分fen的de含han量liang成cheng正zheng比bi,可ke據ju此ci測ce定ding待dai測ce物wu的de濃nong度du。


發射光譜法是通過測量物質的發射光譜的波長和強度,來進行定性和定量分析的方法。


許(xu)多(duo)物(wu)質(zhi)是(shi)光(guang)致(zhi)發(fa)光(guang)的(de),即(ji)它(ta)們(men)可(ke)吸(xi)收(shou)電(dian)磁(ci)輻(fu)射(she),然(ran)後(hou)重(zhong)新(xin)發(fa)射(she)出(chu)相(xiang)同(tong)或(huo)更(geng)長(chang)波(bo)長(chang)的(de)輻(fu)射(she)。光(guang)致(zhi)發(fa)光(guang)最(zui)常(chang)見(jian)的(de)類(lei)型(xing)是(shi)熒(ying)光(guang)和(he)磷(lin)光(guang)。利(li)用(yong)熒(ying)光(guang)強(qiang)度(du)進(jin)行(xing)分(fen)析(xi)的(de)方(fang)法(fa)稱(cheng)為(wei)熒(ying)光(guang)法(fa)。在(zai)熒(ying)光(guang)分(fen)析(xi)中(zhong),待(dai)測(ce)物(wu)質(zhi)分(fen)子(zi)成(cheng)為(wei)激(ji)發(fa)態(tai)時(shi)所(suo)吸(xi)收(shou)的(de)光(guang)稱(cheng)為(wei)激(ji)發(fa)光(guang),處(chu)於(yu)激(ji)發(fa)態(tai)的(de)分(fen)子(zi)回(hui)到(dao)基(ji)態(tai)時(shi)所(suo)產(chan)生(sheng)的(de)熒(ying)光(guang)稱(cheng)發(fa)射(she)光(guang)。熒(ying)光(guang)法(fa)測(ce)定(ding)的(de)是(shi)待(dai)測(ce)物(wu)質(zhi)分(fen)子(zi)受(shou)光(guang)激(ji)發(fa)後(hou)所(suo)發(fa)射(she)的(de)熒(ying)光(guang)的(de)強(qiang)弱(ruo),而(er)不(bu)是(shi)測(ce)激(ji)發(fa)光(guang)的(de)強(qiang)弱(ruo)。凡(fan)能(neng)產(chan)生(sheng)熒(ying)光(guang)的(de)化(hua)合(he)物(wu)均(jun)可(ke)采(cai)用(yong)熒(ying)光(guang)分(fen)析(xi)法(fa)來(lai)進(jin)行(xing)定(ding)性(xing)或(huo)定(ding)量(liang)測(ce)量(liang)。


sansheguangpujishushicedingguangxiantongguorongyehunxuankelihoudeguangxishouhuoguangsanshechengdudeyileidingliangceliangfangfa,zhuyaoyongyumianyijiancexitongzhong,changchengmianyizhuodufa。


電化學分析法 


利用物質的電化學性質測定化學電池的電位、電dian流liu或huo電dian量liang變bian化hua來lai進jin行xing分fen析xi的de方fang法fa稱cheng電dian化hua學xue分fen析xi法fa。電dian化hua學xue分fen析xi法fa有you多duo種zhong,測ce定ding原yuan電dian池chi電dian動dong勢shi以yi求qiu物wu質zhi含han量liang的de分fen析xi方fang法fa稱cheng為wei電dian位wei法fa或huo電dian位wei分fen析xi法fa;通過對電阻的測定以求物質含量的分析法稱為電導法;借jie助zhu某mou些xie物wu理li量liang的de突tu變bian作zuo為wei滴di定ding分fen析xi終zhong點dian的de指zhi示shi,稱cheng為wei電dian容rong量liang分fen析xi法fa。目mu前qian在zai臨lin床chuang中zhong應ying用yong的de電dian化hua學xue分fen析xi法fa主zhu要yao是shi離li子zi選xuan擇ze電dian位wei分fen析xi法fa,該gai方fang法fa利li用yong電dian極ji電dian位wei及ji溶rong液ye內nei活huo性xing物wu質zhi兩liang者zhe間jian的de關guan係xi來lai進jin行xing分fen析xi。


從方法學角度,可將臨床免疫診斷試劑分為免疫比濁法(在散射光譜技術中已介紹)、酶聯免疫法、化學發光等不同類型。


酶聯免疫法 


該gai技ji術shu是shi將jiang酶mei高gao效xiao催cui化hua反fan應ying的de專zhuan一yi性xing和he抗kang原yuan抗kang體ti反fan應ying的de特te異yi性xing結jie合he的de一yi種zhong免mian疫yi標biao記ji檢jian測ce技ji術shu。其qi原yuan理li是shi,將jiang酶mei與yu抗kang體ti或huo抗kang原yuan結jie合he成cheng酶mei標biao記ji結jie合he物wu,酶mei標biao記ji結jie合he物wu既ji保bao留liu了le抗kang原yuan或huo抗kang體ti的de免mian疫yi學xue活huo性xing,又you保bao留liu了le酶mei對dui底di物wu的de催cui化hua活huo性xing,在zai酶mei標biao記ji抗kang體ti與yu抗kang原yuan的de特te異yi性xing反fan應ying完wan成cheng後hou,加jia入ru酶mei作zuo用yong的de相xiang應ying底di物wu,通tong過guo酶mei催cui化hua底di物wu完wan成cheng顯xian色se反fan應ying,對dui抗kang原yuan或huo抗kang體ti進jin行xing定ding位wei、定性和定量測定。


免疫熒光技術 gaijishushiliyongwuzhixishouguangnenghouchanshengjifataierfaguangdetexing,jiangjuyouzhezhongtexingdeyingguangsuyonghuaxuefangfajiehezaiteyidekangtihuokangyuanshang,youbusunhaiqikangtihuokangyuanhuoxingdeyizhongyingguangxianweijingxiadeshizongjishu。


流式細胞術 


該(gai)技(ji)術(shu)是(shi)對(dui)單(dan)細(xi)胞(bao)或(huo)其(qi)他(ta)生(sheng)物(wu)粒(li)子(zi)膜(mo)表(biao)麵(mian)及(ji)內(nei)部(bu)的(de)成(cheng)分(fen)進(jin)行(xing)定(ding)量(liang)分(fen)析(xi)和(he)分(fen)選(xuan)的(de)檢(jian)測(ce)手(shou)段(duan),它(ta)可(ke)高(gao)速(su)分(fen)析(xi)上(shang)萬(wan)個(ge)細(xi)胞(bao),並(bing)能(neng)同(tong)時(shi)從(cong)一(yi)個(ge)細(xi)胞(bao)中(zhong)測(ce)得(de)多(duo)個(ge)參(can)數(shu)。同(tong)傳(chuan)統(tong)的(de)熒(ying)光(guang)鏡(jing)檢(jian)查(zha)相(xiang)比(bi),該(gai)方(fang)法(fa)具(ju)有(you)速(su)度(du)快(kuai)、準確度高等特點。


膠體金技術 


該技術可按照液體的流動形式分為膠體金免疫滲濾試驗和膠體金免疫層析試驗。


化學發光免疫分析 


該技術是將具有高靈敏度的化學發光測定技術與高特異性的免疫反應相結合,用於各種抗原、半抗原、抗體、激素、酶、脂肪酸、維生素和藥物等的檢測分析技術。化學發光免疫分析包含免疫反應係統和化學發光分析係統兩部分。


臨床分子生物學診斷試劑即通常所說的基因診斷試劑,其采用的技術原理主要包括核酸分子雜交技術、DNA測序技術、基因芯片技術等。


核酸分子雜交技術 該技術也稱基因探針技術,是利用核酸的變性、複性和堿基互補配對的原理,用已知的探針序列檢測樣本中是否含有與之配對的核苷酸序列的技術。該技術是臨床應用最早、最基礎的分子生物學技術,是印跡雜交、基因芯片等技術的基礎。


DNA序列分析 


該分析技術是分子生物學重要的基本技術。以某測序儀為例,其采用4種熒光染料分別標記終止物或引物,經Sanger測序反應後,反應產物帶有不同的熒光標記。一個樣品的4gecexufanyingchanwukezaitongyiyongdaoneidianyong,congerjiangdicexuyongdaojianqianyilvchayiduijingquexingdeyingxiang。tongguodianyongjianggegeyingguangbiaojipianduanfenkai,tongshi,jiguangjianceqitongbusaomiao,jifadeyingguangjingguangzhafenguang,yiqufendaibiaobutongjianjixinxidebutongyanseyingguang,bingzaiCCD攝影機上同步成像。電腦可在電泳過程中對儀器運行情況進行同步檢測,結果能以電泳圖譜、熒光吸收峰圖或堿基排列順序等方式輸出。此方法測序為一代測序的基本原理。


高通量測序技術是對傳統測序的革命性改變,可一次性對幾十萬到幾百萬條DNA分子進行序列測定。第二代測序技術將片段化的基因組DNA兩側連上接頭,隨後用不同的方法產生幾百萬個空間固定的PCR克隆陣列。目前該技術已發展到第三代測序技術,即單分子測序技術。

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